抗菌防霉实验室

提供专业的抗菌、防霉技术服务及产品。解决油漆涂料、高聚乳液、胶黏剂密封剂、 皮革及人造革、塑料橡胶、船舶防污、竹材木材、纺织印染等产品领域抗菌防霉方面的技术问题，为客户   提供全方位的抗微生物解决方案，包括但不限于：
1、杀菌剂抑菌圈试验12株混合霉菌（黑曲霉，黄曲霉，杂色曲霉，绳状青霉，球毛壳霉，短柄帚霉，嗜松青霉，腊叶芽枝霉，宛氏拟青霉，桔青霉，绿色木霉，出芽短梗霉）；5株混合细菌（金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，肺炎杆菌，假单胞菌，枯草芽孢杆菌）；2株混合酵母菌（白色念珠菌，光滑球拟酵母菌），实验时间一周；
2、杀菌剂最低抑制浓度（MIC）测试，标准菌2~12株，实验时间半个月；
3、材料防霉持久性挑战测试，琼脂板实验、湿室悬挂法、，实验时间28天）；
4、材料抗菌性能测试（贴膜接触培养法、振荡接触培养法，实验时间5~7天）
5、活菌计数（TVC）（细菌、霉菌和酵母，实验时间2-3天）；
6、霉菌种类初步鉴定
7、微生物污染现场测试与评估（受污工厂）（实验时间一周）；
8、工业杀菌剂的研发合作（时间方案约定）；
9、特殊领域、特殊应用防霉抗菌剂的应用研发（时间方案约定）。

实地技术支持

1、实地了解工厂生产流程中受菌污染的情况；
2、建立车间、设备、管道等环境卫生控制程序；
3、建立原料、工艺水、成品等微生物控制程序；
4，提供有针对性的讲座和培训技术人员。

ABP防腐体系

1、一个杀菌防腐剂在实际应用中能否达到预期的良好效果，取决于以下三个因素： 杀菌防腐剂（Antimicrobial agent）、微生物（Biological）以及客户的产品（Product）。
2、建立成功的防霉防腐体系，不仅仅是杀菌剂工程师、微生物专家需要面对的事，同样也离不开您的参与，沟通与探讨。
3、产品的防霉防腐要求，可以根据客户的生产工艺，选择适合的杀菌防腐剂并配合微生物试验而得到圆满的解决。
4、微生物控制中心为您提供相应的技术支持，建立客户霉腐微生物档案，一起努力构建成功的防霉防腐体系。

滤纸抑菌圈法

【用具和材料】

灭菌培养皿
无菌吸管（或针筒）
圆片滤纸（直径2cm）
带玻璃珠的无菌水
带过滤漏斗的三角瓶
镊子
接种针（环）
熔化状态的琼脂培养基（最好保温于45℃左右的水浴中）
一定浓度的药剂
供试验用的菌种

【试验过程】

（1）用接种环挑取各试管斜面的菌种于带玻璃珠的无菌水中，用手振荡数分钟使孢子分散，过滤后制成混合孢子悬液。
（2）用无菌吸管（或针筒）向各培养皿中注入一定浓度的混合孢子悬浮液0.5mL。
（3）向各培养皿内注入15～20mL的熔化状琼脂培养基（约45℃），将菌液与培养基混合均匀，待其冷却。
（4）用镊子将圆片滤纸在不同浓度的防霉剂中浸渍片刻，取出置于带菌培养基平板的中央，盖上盖子。
（5）置适宜温度下，培养2～3d，观察滤纸圆片周围抑菌圈的有无及大小

【注意事项】

（1）所用的操作用具和材料都要事先做灭菌处理，操作必须在无菌室（或无菌箱）内于火焰旁进行。
（2）霉菌、细菌、酵母菌等各种微生物都必须分别配制混合菌液，即这里指的混合菌液是霉菌、细菌或酵母菌等诸种菌的混合液，并非霉菌、细菌和酵母菌的混合液。（3）混合菌液的浓度一般为106～108cfu/mL。
（4）倒入培养皿的琼脂培养基温度不能太高（一般为45℃左右），否则会引起微生物的死亡。也不能太低，因为琼脂会很快凝结，以致搅拌不均匀，影响试验结果。
（5）各种微生物的最适生长温度不同（例如:霉菌一般为25～30℃，细菌一般为32～37℃等），恒温培养时宜分开放置。

【结果评判】

由于滤纸圆片所吸附的药液慢慢向四周扩散，因此在滤纸片的周围就出现清晰的抑菌圈（假如该防霉剂对供试菌有抑制效果的话）。抑菌圈的大小代表药剂抗菌力的高低。在一定的药剂浓度范围内，药剂的浓度越高则抑菌圈的直径越大。当然，此法同样适合于测定单个菌的抗菌效果。

最低抑制浓度法（MIC法）

【用具和材料】

灭菌培养皿（直径9cm）
无菌吸管或针筒
45℃左右的琼脂培养基（最好保温于45℃左右的水浴中）
不同浓度的药剂
供试验用的孢子悬液

【试验过程】

（1）用无菌吸管吸取不同浓度的药剂1mL依次注入灭过菌的培养皿中。
（2）用无菌吸管（或针筒）吸取各种供试菌液0.5mL，依次放到上述培养皿中。（3）立即在各培养皿中注入15mL或20mL琼脂培养基（注入的量要恒定），摇匀，盖上盖子。
（4）凝固后，置适宜温度下培养一定的时间，观察其生长情况。

【注意事项】

（1）各培养皿中注入的培养基数量要恒定（如15L或20mL等），否则会影响培养基中药剂的浓度。
（2）加入的药剂量各1mL，宜预先计算好浓度，注入培养基后的最终浓度才是药剂的正确浓度。
（3）每种菌都要做不同的药剂浓度试验，假如有10个不同的药剂浓度，使用17株菌的话，就得做170个试样，若一次完成，工作量太大，可分批进行。
（4）药剂、菌液与培养基要搅拌均匀，否则影响试验结果。
（5）药剂对微生物生长的最低抑制浓度的确定也可以采用其他方法（例如:点菌法、液体培养法等）。

【结果评判】

如果培养皿上有菌落生长，说明该浓度的药剂抑制微生物的生长，反之则说明该浓度的药剂不抑制微生物的生长。抑制微生物生长的最小浓度，即为药剂对此种微生物的最低抑制浓度。
下面就以某种药剂为例，详细介绍最低抑制浓度的判定。

圆片培养皿法

圆片培养皿法适宜于测定质地比较柔软、厚度比较小的材料或制品，例如:纸张、纺织品、皮革、塑料、感光材料等。有些材料或制品虽然体积较大，但可采用裁剪工具适当减薄或减小，做成所要求的规格。有些液状材料或制品，例如:合成洗涤剂、乳胶涂料、轧制乳化液以及黏胶剂等，可借用滤纸做载体。各种材料或制品做成一定直径大小圆片的目的，主要是为了观察抑菌圈。一般地说抑菌圈的大小即代表材料或制品防霉力的高低。

【用具和材料】

灭菌培养皿（直径9cm）
灭菌刻度吸管（或针筒）
裁剪工具
不锈钢镊子
接种针（环）
熔化状态的琼脂培养基（最好保温于45℃左右的水浴中）
供试样品
供试验用的孢子悬液

【试验过程】

（1）将材料或制品裁剪成直径为3cm左右的圆片。
（2）用刻度吸管（或针筒）向各灭菌培养皿中注入一定量的孢子悬浮液。
（3）向上述培养皿内倒入15mL左右的熔化状态的琼脂培养基（45℃左右），摇匀，放置，凝固。
（4）用镊子将试样置于上述带菌培养基平板的中央，盖上盖子。
（5）置适宜温度下，培养一定的时间，观察结果并记录。

【注意事项】

（1）假如供试材料或制品体积小、硬度大、形状不规则等，无法裁剪时，则可采用其他方法进行测试。
（2）此法既可采用单个菌测试，亦可采用混合菌测试；既可采用霉菌测试，亦可采用细菌或其他菌测定。
（3）必须在同样条件下，做空白对照试验（即使用未添加过防霉剂的材料或制品作对照）。
（4）观察时间一般为7d、14d、21d、28d，应注意保持培养皿的湿度。
（5）制作带菌培养基平板时，应控制培养基的温度在45℃左右。否则，温度太高，会杀死微生物；而太低便会迅速凝固。
可以对此法进行改良，先配制成不带菌的琼脂培养基平板，即在培养基倒入培养皿之前不先加入孢子悬浮液。此时，培养基的温度就不一定控制在45℃左右，温度稍高亦无妨。待培养基凝固后，用灭菌刻度吸管（或针筒）向各培养基平板内注入一定量的供试菌孢子悬浮液，接着用灭菌玻璃涂棒将菌液涂布均匀。再在带菌培养基平板的中央放置一片直径为3cm左右的样品置适宜温度下，培养一定的时间，观察结果。
也可以先将一定量的孢子悬浮液注入45℃左右的熔化状琼脂培养基中，充分混合，立即向各灭菌培养皿内倒入15mL左右的带菌培养基。凝固后，再将直径3cm的供试样品置于带菌培养基平板的中央，置适宜温度下培养一定的时间，观察结果。

【结果评判】

由于材料或制品添加过防霉剂，当试样圆片置于带菌培养基平板的中央时，其防霉剂就逐渐向四周扩散、渗透。假如该防霉剂的抗菌效果较佳的话，则试样的周围就呈现出明显的抑菌圈，无疑试样上面亦不长菌。一般地说，抑菌圈的大小即代表材料或制品防霉力的高低。同样也可以对没有添加过防霉剂的材料或制品进行防霉力的判断

湿室挂片法

所谓湿室挂片法，就是在保持一定温度和湿度的空间内悬挂一系列喷洒上孢子悬浮液的供试样品，定期观察其霉变情况。

【用具和材料】

调温调湿箱（或调温调湿室）
密闭玻璃柜
裁剪工具
供试样品
供试验用的霉菌孢子悬液

【试验过程】

（1）将添加过防霉剂的材料或制品裁剪成一定大小的试样（例如:20mm×200mm或40mm×100mm等）。
（2）将裁剪好的试样悬挂在密闭的玻璃柜内，均匀地喷洒上霉菌孢子悬浮液。（3）将喷洒上菌液的试样移至调温调湿箱（或室），依次悬挂。
（4）调节所需要的温度和湿度（例如:温度28℃相对湿度95％等），定时观察结果并记录。

【注意事项】

（1）试样的大小视情况而定，不求一律。有些材料或制品本身体积小或硬度大，就不必裁剪。
（2）喷洒孢子悬浮液的浓度一般为10～10cfu/mL，以洒湿试样表面为宜。
（3）试样必须依次悬挂，并保持一定的距离，且不要贴住箱壁。
（4）观察时间一般为7d、14d、21d、28d
（5）此法同样适宜于判断没有添加过防霉剂的材料或制品的防霉力。

【结果评判】

试样在调温调湿箱（或室）内悬挂一定时间以后，即用肉眼观察其表面菌的生长情况。假如某种材料或制品具有防霉力，则在试样的表面就看不到菌丝的生长。反之，不具防霉力的材料或制品，就能在试样的表面看到菌丝的生长。一般来说，由试样表面菌丝生长繁殖的程度可以判断材料或制品防霉力的高低，如表3-7所示。一般来说，经过28天恒温恒湿喷洒菌考验后，材料或制品的防霉力达到0级或1级为合格，否则为不合格

活菌计数法

菌落总数，系指1g或1mL样品，经过处理，在一定条件下培养后，所得细菌菌落的总数。菌落总数是作为判定样品被污染程度的重要依据。

【用具和材料】

灭菌培养皿（直径9cm）
熔化状态的琼脂培养基（最好保温于45℃左右的水浴中）
250mL灭菌玻璃瓶内装100mL无菌生理盐水
装有4.5mL无菌生理盐水的灭菌小试管
无菌吸管
玻璃刮棒
被检样品

【试验过程】

（1）以无菌操作，将检样10g（或10mL）放于含有100mL（如检样为液体，则改为90mL）灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨成1:10的均匀稀释液。
（2）用1mL灭菌吸管，吸取1:10稀释液0.5mL，注入含有4.5mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀成1:100稀释液。
（3）另取1mL灭菌吸管，按上项操作顺序做10倍梯度稀释，如此每稀释一次，即换用1支1mL灭菌吸管。
（4）根据对标本污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在做10倍梯度稀释的同时即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做2个平皿。
（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至45℃的营养琼脂培养基倾注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。
（6）待琼脂凝固后，倒置于37℃温箱内培养24～48h取出，计算平皿内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克（或每毫升）样品所含菌落总数。

【注意事项】

（1）所用的操作用具和材料都要事先做灭菌处理，操作必须在无菌室（或无菌箱）内于火焰旁进行。
（2）倒入培养皿的琼脂培养基温度不能太高（一般为45℃左右），否则会引起微生物的死亡。也不能太低，因为琼脂会很快凝结，以致搅拌不均匀，影响试验结果。（3）各种微生物的最适生长条件不同，因而霉菌和细菌的计数要分别选择不同的培养基（例如霉菌用麦芽汁培养基，细菌用蛋白陈牛肉膏培养基等）和培养温度（例如:霉菌一般为25～30℃，细菌一般为32～37℃等），恒温培养时宜分开放置。
（4）作平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，求出同稀释度的各平皿平均菌落数。